Фармацевтическая химия и фармакогнозия - кейс 108 — задача № 108

Правильный ответ: подлинность и чистота

• подлинность и чистота

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод вестерн-блот, один из вариантов иммуноблоттинга, который используют для оценки подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП)»

Правильный ответ: электрофорез

• электрофорез

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот (ГФ XIV)
  
  «На первом этапе проводят электрофорез в полиакриламидном геле с натрия додецилсульфатом (так называемый, SDS-PAGE электрофорез) для разделения белков.»

Правильный ответ: обработки (гибридизации) исследуемого препарата антителами

• обработки (гибридизации) исследуемого препарата антителами

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот (ГФ XIV)
  
  «Для детекции результатов метода вестерн-блот проводят обработку (гибридизацию) исследуемого препарата антителами.»

Правильный ответ: нитратом серебра

• нитратом серебра

  ОФС.1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле (ГФ ХIV)
  
  «Окрашивание нитратом серебра – более чувствительный метод окрашивания белков в гелях, позволяющий выявлять до 1 нг белка.»

Правильный ответ: тетраметилэтилендиамин

• тетраметилэтилендиамин

  ОФС.1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле
  
  «Полимеризация катализируется системой, производящей свободные радикалы, составленной из аммония персульфата и тетраметилэтилендиамина»

Правильный ответ: уменьшив концентрацию акриламида

• уменьшив концентрацию акриламида

  ОФС.1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле
  
  «С увеличением концентрации акриламида в геле эффективный размер пор уменьшается.»

Правильный ответ: маркеры молекулярных масс распределены равномерно по всей длине соответствующей дорожки геля

• маркеры молекулярных масс распределены равномерно по всей длине соответствующей дорожки геля

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот (ГФ XIV)
  
  «Результаты метода вестер-блот могут учитываться, если: маркеры молекулярных масс распределены равномерно по всей длине соответствующей дорожки геля…»

Правильный ответ: соответствие содержания выявляемой примеси в стандартном образце диапазону, установленному в свидетельстве на стандартный образец

• соответствие содержания выявляемой примеси в стандартном образце диапазону, установленному в свидетельстве на стандартный образец

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Критерии приемлемости результатов: … соответствие содержания выявляемой примеси в стандартном образце диапазону, установленному в свидетельстве на стандартный образец.»

Правильный ответ: предотвращения неспецифической сорбции антител на мембране

• предотвращения неспецифической сорбции антител на мембране

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Для детекции результатов метода вестерн-блот проводят обработку (гибридизацию) исследуемого препарата антителами. Для этого мембрану с перенесенными на нее белками помещают в контейнер с блокирующим буферным раствором и инкубируют на орбитальном шейкере в течение 30 – 60 мин (если не предусмотрено иное в фармакопейной статье или нормативной документации) для предотвращения неспецифической сорбции антител на мембране.»

Правильный ответ: поликлональные анти-мышиные антитела

• поликлональные анти-мышиные антитела

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот (ГФ XIV)
  
  «В качестве вторых антител используют поликлональные антитела к иммуноглобулинам того вида животного, которое использовалось для получения первых антител.»

Правильный ответ: деионизированной водой

• деионизированной водой

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Проявление картины иммуноблота на мембране проводят раствором тетраметилбензидинового субстрата (ТМВ) для антител, конъюгированных с пероксидазой хрена, или раствором для проявления щелочной фосфатазы – при использовании антител, конъюгированных со щелочной фосфатазой (если нет иных указаний в фармакопейной статье или нормативной документации). Реакцию останавливают, промывая блот деионизованной водой. С поверхности мембраны удаляют излишек воды фильтровальной бумагой и высушивают на воздухе в темном месте.»

Правильный ответ: пероксидаза хрена

• пероксидаза хрена

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Проявление картины иммуноблота на мембране проводят раствором тетраметилбензидинового субстрата (ТМВ) для антител, конъюгированных с пероксидазой хрена, или раствором для проявления щелочной фосфатазы – при использовании антител, конъюгированных со щелочной фосфатазой (если нет иных указаний в фармакопейной статье или нормативной документации).»