Фармацевтическая химия и фармакогнозия - кейс 138 — задача № 138

Правильный ответ: подлинность и чистота

• подлинность и чистота

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод вестерн-блот, один из вариантов иммуноблоттинга, который используют для оценки подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП) на основе высокоочищенных белков, в том числе, полученных по технологии рекомбинантной ДНК.»

Правильный ответ: натрия додецилсульфат

• натрия додецилсульфат

  ОФС.1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле
  
  «Электрофорез в полиакриламидных гелях с использованием натрия додецилсульфата (SDS) – наиболее распространенный способ электрофореза, используемый для оценки подлинности и чистоты белковых продуктов. Денатурированные под воздействием высокой температуры полипептиды, связываясь с анионным детергентом SDS.»

Правильный ответ: молекулярной массе белка

• молекулярной массе белка

  ОФС.1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле
  
  «Денатурированные под воздействием высокой температуры полипептиды, связываясь с анионным детергентом SDS, становятся отрицательно заряженными и приобретают конформацию, при которой радиус Стокса является функцией молекулярной массы независимо от типа белка. Поскольку количество связанного SDS почти всегда пропорционально молекулярной массе полипептида и не зависит от последовательности аминокислот в полипептиде, SDS-полипептидные комплексы мигрируют через полиакриламидные гели с подвижностью, прямо пропорциональной молекулярной массе полипептида.»

Правильный ответ: изменение уровня освещенности помещения

• изменение уровня освещенности помещения

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Валидации подлежат следующие изменения: использование различного количества наносимых на гель проб; изменение условий переноса белков с геля на мембрану, включая изменение используемого оборудования; изменения состава буферных растворов; изменение способа детекции исследуемого вещества.»

Правильный ответ: аммония персульфат и тетраметилэтилендиамин

• аммония персульфат и тетраметилэтилендиамин

  ОФС.1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле
  
  «Полимеризация катализируется системой, производящей свободные радикалы, составленной из аммония персульфата и тетраметилэтилендиамина.»

Правильный ответ: увеличив концентрацию акриламида

• увеличив концентрацию акриламида

  ОФС.1.2.1.0023.15 Электрофорез в полиакриламидном геле
  
  «С увеличением концентрации акриламида в геле эффективный размер пор уменьшается.»

Правильный ответ: молекулярных масс распределены равномерно по всей длине соответствующей дорожки геля

• молекулярных масс распределены равномерно по всей длине соответствующей дорожки геля

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Результаты метода вестер-блот могут учитываться, если: … маркеры молекулярных масс распределены равномерно по всей длине соответствующей дорожки геля …»

Правильный ответ: соответствие содержания выявляемой примеси в стандартном образце диапазону, установленному в свидетельстве на стандартный образец

• соответствие содержания выявляемой примеси в стандартном образце диапазону, установленному в свидетельстве на стандартный образец

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Критерии приемлемости результатов: … соответствие содержания выявляемой примеси в стандартном образце диапазону, установленному в свидетельстве на стандартный образец.»

Правильный ответ: блокирующим буфером

• блокирующим буфером

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Для детекции результатов метода вестерн-блот проводят обработку (гибридизацию) исследуемого препарата антителами. Для этого мембрану с перенесенными на нее белками помещают в контейнер с блокирующим буферным раствором и инкубируют на орбитальном шейкере в течение 30 – 60 мин (если не предусмотрено иное в фармакопейной статье или нормативной документации) для предотвращения неспецифической сорбции антител на мембране.»

Правильный ответ: того вида животного, которое использовалось для получения первых антител

• того вида животного, которое использовалось для получения первых антител

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «В качестве вторых антител используют поликлональные антитела к иммуноглобулинам того вида животного, которое использовалось для получения первых антител.»

Правильный ответ: гибридизация

• гибридизация

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Для детекции результатов метода вестерн-блот проводят обработку (гибридизацию) исследуемого препарата антителами. … После отмывки мембраны, проводят обработку (гибридизацию) раствором вторых антител.»

Правильный ответ: тетраметилбензидиновым субстратом

• тетраметилбензидиновым субстратом

  ОФС.1.7.2.0022.15 Определение подлинности и чистоты иммунобиологических лекарственных препаратов методом вестерн-блот
  
  «Проявление картины иммуноблота на мембране проводят раствором тетраметилбензидинового субстрата (ТМВ) для антител, конъюгированных с пероксидазой хрена, или раствором для проявления щелочной фосфатазы – при использовании антител, конъюгированных со щелочной фосфатазой (если нет иных указаний в фармакопейной статье или нормативной документации).»